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產品選擇指南

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機構用戶解決方案

Capturem Trypsin
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Clontech 635722 Capturem Trypsin 20 rxns ¥3,060
 
■ 產品簡介
蛋白質質譜分析前的樣品消化步驟,通常需要4個小時甚至過夜,如果使用Capturem Trypsin 或 Capturem Pepsin,可在室溫下快速,高效和完全的消化蛋白質,從而使蛋白質組學分析流程更加連貫。這兩款產品是一次性小型離心柱的形式,應用新型膜技術,膜上固定有胰蛋白酶(Trypsin)或胃蛋白酶(Pepsin),在短短幾分鍾內即可高效、完全地酶解蛋白質樣品,與傳統的溶液法過夜處理相比,時間更短、效率更高、重複性更好、胰蛋白酶自溶片段更少,避免發生過度消化。
 
■ 快速、簡單的操作流程
Capturem Trypsin 和 Capturem Pepsin包含小型離心柱和活化buffer,操作流程簡單、快速,隻需要加入200 μl活化buffer離心1 min,然後加入蛋白質樣品再離心1 min,即可洗脫獲得可用於下遊分析的肽段。
 
 
■ 產品特點
·操作快速,2 min-3 min內即可酶解蛋白質樣品,無需過夜處理
·比溶液法效率更高,酶解更徹底
·樣品中自溶片段更少,蛋白質非特異性修飾幾率更低
·可以使整個蛋白質組學分析流程更加連貫,實現更有效的肽和蛋白質的質譜鑒定
 
■ 應用
·蛋白質鑒定
·蛋白質組學分析
·質譜樣品製備
·抗體鑒定
 
■ 實驗例
 
使用Capturem Trypsin對BT474全AG8.AG亚游官网裂解液進行酶解消化並做蛋白質組學分析。通過RP-HPLC將裂解液分成19個獨立的組分(圖A),然後再使用Capturem Trypsin對每個組分單獨酶解,並使用LC/MS-MS分析,每個組分中帶有2個或以上的特異性肽段的蛋白質總數被鑒定並繪製出,如B圖所示。
 
使用Capturem Trypsin可以實現快速完全的Apomyoglobin(Apo)酶解。上圖為使用RP-HPLC分析Capturem Trypsin和常規溶液法酶解蛋白質的結果,圖A為未酶解的完整蛋白質,圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質,圖C為使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白質,結果顯示使用Capturem Trypsin酶解的非常徹底。
 
使用Capturem Trypsin可以酶解緊密折疊的蛋白質Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC對Capturem Trypsin和常規溶液法酶解的產物進行分析,圖A為未酶解的完整蛋白質,圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質,圖C為使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白質,結果顯示使用Capturem Trypsin可以快速有效地酶解緊密折疊的蛋白質。
 
Capturem Pepsin的操作流程。在酶消化之前,抗體樣品被變性和還原。使用附帶的活化buffer初次活化柱子後,將還原處理後的抗體樣品溶液(50-800 μl)加入離心柱中,離心1分鍾。 在這個過程中,柱上發生胃蛋白酶消化,隨後再一次離心洗脫即可獲得肽片段,加入NaOH中和洗脫的肽片段,即可用於下遊分析。
 
使用Capturem Pepsin消化不同的小鼠抗體同種型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取
100 μg,使用TCEP和醋酸於75℃處理15 min進行變性操作,然後用5%甲酸buffer稀釋。使用Capturem Pepsin對稀釋的樣品進行消化,通過SDS-PAGE對消化和未消化的樣品(各取4 μg)進行檢測,如上圖所示。
 
不同批次的Capturem Pepsin消化產物HPLC圖譜比較。使用5%的甲酸稀釋50 μg的Apo,選擇3個不同批次的Capturem Pepsin對其進行消化,HPLC結果顯示三組消化產物具有相同的片段,說明Capturem Pepsin具有良好的重複性。
 
Capturem Pepsin與pepsin溶液法消化結果比較。對50 μg 的anti-HER2單克隆抗體使用3種方法進行消化,分別是Capturem Pepsin,pepsin溶液法孵育4小時,pepsin溶液法孵育過夜。然後進行質譜分析。由上圖可以看出,使用溶液法的消化產物峰左移並且總體峰的數量較多,說明產生了過度消化,而使用Capturem Pepsin則沒有這個問題。
 
 
產品詳情請點擊以下鏈接:
https://www.takarabio.com/products/protein-research/mass-spectrometry-reagents/
protein-digestion-capturem-trypsin-and-pepsin
 
 
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